欢迎光临山东省分析测试协会网站                                                  欢迎您光临山东国际科学仪器及实验室装备展览会网站

会议论文

下载中心

高速逆流色谱与蒸发光散射检测器联用分离纯化银杏内酯

刘晶1,孙爱玲1,张永清2,柳仁民1

(1.聊城大学化学化工学院,山东聊城,252059;2.山东中医药大学,山东济南,250000)

 

摘要:建立了利用流动注射技术将高速逆流色谱与蒸发光散射检测器的连接分离纯化银杏内酯。两对溶剂体系分别为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:1:5, v/v)和正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:2:5, v/v)。固定相是前者的上相,流动相是前者的下相和后者,以梯度洗脱的方式进行。从500mg初步纯化后的银杏内酯中得到107mg银杏内酯A, 64mg银杏内酯B, 52mg银杏内酯C和83mg白果内酯,纯度均大于98%。采用1H-NMR和13C-NMR对各组分的结构进行鉴定。

关键词:高速逆流色谱;蒸发光散射检测器;流动注射技术;银杏叶;银杏内酯

引言

银杏叶中的银杏内酯可治疗冠心病,心绞痛,中风,偏瘫等,而且还可作为血小板活化因子的拮抗剂[1,2]。因此,有必要建立一种从银杏叶中分离纯化银杏内酯的方法。曾有文章报道过经两次HSCCC从银杏叶中分离纯化银杏内酯[3],但其在整个分离过程中未能实现ELSD的在线检测。

本文利用流动注射技术建立了HSCCC-ELSD在线检测体系,尝试了一种分离银杏内酯的新方法。该方法简单易行,节省样品,并实现了一次HSCCC分离制备便可得到4种银杏内酯成分。

1实验部分

1.1仪器、试剂与材料

TBE-300A高速逆流色谱仪(上海同田生化技术有限公司);Alltech2000ES ELSD(Alltech, USA); Mercury Plus 400 NMR核磁共振仪(美国瓦里安公司)。

粗提物的制备及HSCCC分离用溶剂均为分析纯(济南试剂厂), HPLC分析用甲醇和四氢呋喃为色谱纯(Tedia, USA), HPLC用水为纯净水。

银杏药材购于聊城市利民大药店,经山东中医药大学张永清教授鉴定为正品药材。

1.2实验方法

1.2.1样品的准备

500g银杏叶粉末首先经石油醚脱脂,其次用70%乙醇回流,浓缩至无醇味的提取液用0.2M的NaOH调节PH至8.5后,再用乙酸乙酯萃取,浓缩得到的浸膏经酸性氧化铝柱纯化,最后得到2.4g纯度较高的银杏内酯成分。

1.2.2 HSCCC分离过程

将制备好的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:1:5, v/v)的上相和下相分别泵入高速逆流色谱仪的螺旋管,当达到流体动力学平衡时,将备好的样品溶液注入分离螺旋管。从分离螺旋管流出的组分经六通进样阀每2min进入ELSD一次, 20min后完成样品注射。各组分依据HSCCC-ELSD色谱图手动收集,HPLC检测纯度。

1.2.3纯度分析及结构鉴定

粗提物及经HSCCC分离得到的各组分均由HPLC-ELSD进行检测。色谱条件如下:Spherigel ODS C18柱(250mm´4.6mm I.D., 5µm);流动相:甲醇-四氢呋喃-水(26:8:66, v/v);流动相流速:1.0mL/min;漂移管温度:90°C;载气流速:2.4L/min.

HSCCC分离纯化出来的各组分由1H-NMR and 13C-NMR进行结构鉴定。

2结果与讨论

2.1 HSCCC-ELSD条件的优化

通过考察不同的HPLC洗脱体系,当选择甲醇-四氢呋喃-水(26:8:66, v/v)作为流动相,流速为1.0mL/min时,4种银杏内酯化合物的色谱峰都可以达到基线分离。图1为纯化后银杏内酯的HPLC-ELSD图。

图1 HPLC-ELSD色谱图

2.2 HSCCCELSD的连接与在线检测

本文通过六通进样阀将HSCCC与ELSD连接起来。HSCCC柱的流出物经过六通进样阀,通过每2min旋转进样阀一次,样品进入检测器检测。由于样品环的体积是20mL,从而节省了大量样品并具有实际应用价值。图2为HSCCC-ELSD连接原理图。

2.3 HSCCC分离条件的优化

本文分别对不同的溶剂体系,流动相的流速,色谱柱的转速和温度进行了优化,发现当选择正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:1:5, v/v)的上相作为固定相,正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:1:5, v/v)的下相和正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:2:5, v/v)作为流动相并且进行梯度洗脱,流动相的流速为2.0mL/min, 色谱柱转速为900 rpm, 温度为20°C时,各组分都能得到很好的分离,确定为HSCCC最佳的分离制备条件。图3为HSCCC-ELSD色谱图。

 

图2 HSCCC与ELSD的连接原理图

图3 HSCCC-ELSD色谱图

3结论

本文实现了ELSD在HSCCC分离过程中的在线检测,建立了一种简单快捷的分离纯化银杏内酯化合物的HSCCC-ELSD方法。该方法为分离没有紫外吸收或末端吸收的化合物提供了很好的借鉴。

参考文献

[1]廖建平, 杨敏毅, 朱庆春. 银杏叶提取物的药理作用研究进展[J].人民军医,2010,53(8):619-620.

[2]蒋小琴. 银杏叶提取物的临床研究进展[J].中医药导报,2009,15(4):115-117.

[3]苏静, 谈锋, 李连强等. 高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C[J].中草药,2008,39(11):1644-1648.

 

作者:刘晶,聊城大学分析化学专业研究生;通讯作者:柳仁民,教授,聊城大学化学化工学院,电话:0635-8239069,电子邮箱:renminliu@163.com

设为首页 | 加入收藏  | 通知公告 | 联系我们

版权所有:山东省分析测试协会鲁ICP备05039987号-2鲁公网安备110102006209-2-2

地址:济南市历下区科院路19号山东省分析测试中心315室邮编:250001电话:0531-82605476  82600920  82600921邮箱:sdaia@sina.com 网址:www.sdaia.org.cn

技术支持 : 中轩网

点击关闭
  • http://www.sdaia.org.cn/ http://www.sdaia.org.cn/ http://www.sdaia.org.cn/